Avaliação da atividade funcional dos neutrófilos sanguíneos em ovelhas primíparas e pluríparas da raça Lacaune / [Functional evaluation of blood neutrophils in primiparous and pluriparous Lacaune ewes]

This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)

Estresse oxidativo em cães com doença periodontal: comparação dos biomarcadores plasmáticos e salivares / Oxidative stress in dogs with periodontal disease: comparison of plasmatic and salivary biomarkers

A doença periodontal (DP) é a enfermidade inflamatória mais comum da cavidade oral dos cães. A quantificação de biomarcadores do plasma e da saliva tem sido utilizada para avaliar o estresse oxidativo sistêmico (EOS) e local (EOL) da DP humana. Na DP canina, os mecanismos do estresse oxidativo não estão bem caracterizados e estabelecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar a hipótese de que o EOS ocorre na DP canina e de que a saliva pode ser utilizada para avaliar o EOL. Analisou-se, também, a hipótese de que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos contribui para EOS na DP dos cães. Para tal, foram selecionados 20 cães adultos portadores de DP, agrupados de acordo com o grau de lesão: gengivite (n=6), periodontites leve (n=8) e avançada (n=6). O grupo controle foi composto pelos mesmos 20 cães, 30 dias após o tratamento periodontal. Para avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos circulantes foi quantificada a produção de superóxido pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). As concentrações de oxidante total (TOC) e de espécies reativas ao ácido tiobartbitúrico (TBARS) no plasma foram quantificadas para avaliar o EOS. Para a avaliação do estresse oxidativo local, foi quantificado o TOC salivar e a concentração dos principais antioxidantes da saliva (albumina, ácido úrico e bilirrubina total). O EOS na DP foi confirmado pelo aumento da produção de superóxido dos neutrófilos circulantes, TOC e TBARS plasmático. Foi possível quantificar todos os biomarcadores na saliva de cães, porém nenhum foi capaz de expressar o EOL da DP canina. Esta é uma das primeiras evidências de que o EOS ocorre em cães com DP e que a ativação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos pode contribuir para desequilíbrio entre antioxidantes e oxidantes. Este estudo ressalta a importância da higiene bucal dos cães para a prevenção da DP e de lesões degenerativas crônicas de diversos tecidos causadas pelo EOS.(AU)

Periodontal disease (PD) is the most common inflammatory disease of the oral cavity of dogs. Quantitation of plasma and salivary biomarkers have been used to assess the systemic oxidative stress (SOS) and local (LOS) of human PD. In canine PD, oxidative stress mechanisms are not well characterized and established. Our objective was to investigate the hypothesis that SOS occurs in dog PD and saliva can be used to evaluate the LOS. We also investigated the hypothesis that the activation of neutrophil oxidative metabolism contributes to SOS in dog SD. For this purpose, 20 adult dogs were selected PD patients, grouped according to the degree of injury: gingivitis (n=6), light periodontitis (n=8) and advanced periodontitis (n=6). The control group was composed of the same 20 dogs, 30 days after periodontal treatment. To assess oxidative metabolism of circulating neutrophils superoxide production was measured by test nitroblue tetrazolium reduction (NBT). The total oxidant concentrations (TOC) and reactive species to tiobartbitúrico acid (TBARS) in plasma were quantified to evaluate SOS. For the evaluation of local oxidative stress were quantified salivary TOC and concentration of the main antioxidant in saliva (albumin, uric acid, and total bilirubin). EOS in dogs with PD was confirmed by increased superoxide production of circulating neutrophils, TOC, and plasma TBARS. It was possible to quantify all the biomarkers in the saliva of dogs, but none was able to express the LOS canine PD. This is the first evidence that SOS occurs in dogs with PD and that activation of the oxidative metabolism of neutrophils may contribute to an imbalance between oxidants and antioxidants. This study highlights the importance of oral hygiene of dogs to prevent PD and chronic degenerative lesions of various tissues caused by SOS.(AU)

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos / Comparison among two methodologys at realization nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) in caprines

O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500µL em tubo "eppendorff" contendo 2µL de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P<0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.(AU)

The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500µL sample was taken in eppendoff tubes with 2µL of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P<0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.(AU)

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos

Abstract: The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500L sample was taken in eppendoff tubes with 2L of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P 0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.

Resumo: O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500L em tubo "eppendorff" contendo 2L de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P 0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.

Exogenous ATP administration prevents ischemia/reperfusion-induced oxidative stress and tissue injury by modulation of hypoxanthine metabolic pathway in rat ovary / Administração exógena de ATP impede isquemia/induzidas por reperfusão de estresse oxidativo de tecidos e lesões pela modulação da hipoxantina via metabólica em ovários de ratos

In this study, xanthine oxidase (XO), malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO) and glutathione (GSH) levels in the ovarian tissues of rats during the development of ischemia and postischemia-induced reperfusion were investigated, and the effect of ATP on ischemia-reperfusion (I/R) damage was biochemically and histopathologically examined. The results of the biochemical analyses demonstrated that ATP significantly reduced the level of XO and MDA and increased the amount of GSH in both ischemia and I/R-applied ovarian tissue at the doses administered. Furthermore, ATP significantly suppressed the increase in MPO activity that occurred following the application of post ischemia reperfusion in the ovarian tissue. The biochemical results obtained in the present study coincide with the histological findings. The severity of the pathological findings, such as dilatation, congestion, haemorrhage, oedema and polymorphonuclear nuclear leukocytes (PMNLs), increased in parallel with the increase observed in the products of XO metabolism. In conclusion, exogenously applied ATP prevented I/R damage by reducing the formation of XO in ischemic ovarian tissue.

Neste estudo, a xantina oxidase (XO), o malondialdeído (MDA), mieloperoxidase ( MPO ) e glutationa ( GSH) nos tecidos do ovário de ratos, durante o desenvolvimento de isquemia e reperfusão induzida por pós-isquemia foi investigada, e o efeito de ATP em isquemia e reperfusão (I/R). O dano foi verificado por provas bioquímicas e por histopatologia. Os resultados das análises bioquímicas mostraram que o ATP reduziu significativamente o nível de XO e MDA e aumentou a quantidade de GSH em ambas as isquemia e no tecido do ovário de I / R - aplicado nas doses administradas. Além disso, o ATP suprimiu significativamente o aumento na atividade de MPO que ocorreu na sequência da aplicação de pós-isquemia reperfusão no tecido ovariano. Os resultados bioquímicos obtidos no presente estudo coincidem com os achados histológicos. A gravidade dos achados patológicos, como a dilatação, congestão, hemorragia, edema e polimorfonucleares leucócitos nucleares (PMNLs), aumentou em paralelo com o aumento observado nos produtos do metabolismo XO. Em conclusão, aplicando exogenamente ATP impedido de I/R, houve danos pela redução da formação de tecido de ovário de XO na isquemia.

Oxidative metabolism and muscle biochemical profile of polo horses supplemented with an ADE vitamin complex / Metabolismo oxidativo e perfil bioquímico muscular de cavalos de pólo suplementados com complexo vitamínico ADE

Horses used for the game of polo experience abrupt and frequent changes in exercise intensity. To meet this variable energy demand, the horses use both aerobic and anaerobic pathways in varying proportions and intensities. In this context, there must be a balance between the formation of reactive oxygen species (ROS) and the action of antioxidants to prevent oxidative stress and its consequences. The effect of supplementation with an ADE vitamin complex on oxidative metabolism was evaluated in 18 crossbred horses randomly divided between a treated group (TG) and a control group (CG). The TG animals received the ADE vitamin complex (1mL/50 kg of body weight) by deep intramuscular injection at 30 and 15 days before the game. The CG horses received 10ml of saline by the same administration route and schedule. During the polo match, the animals played for a total of 7.5 min. Blood samples were collected on the same days as the treatments were administered, and immediately before and at 15, 90 and 180 minutes after the game. The concentrations of creatine phosphokinase (CK), lactate dehydrogenase (LDH), lactate, glucose, aspartate aminotransferase (AST), glutathione (GSH), superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) were measured in the blood samples. After the game, the TG demonstrated higher levels of AST, lactate and glucose than the CG, suggesting more efficient energy use by the treated animals. The higher GSH and lower lactate levels in the TG before the game suggest the presence of a greater antioxidant supply in the treated animals. The maintenance of the MDA levels indicates that neither of the groups exhibited oxidative stress.

O jogo de pólo se caracteriza por mudanças abruptas e frequentes na intensidade do exercício dos cavalos. Para satisfazer esta demanda inconstante de energia, os animais utilizam as vias aeróbia e anaeróbia em proporções e intensidade variáveis. Neste contexto deve haver equilíbrio entre a formação das espécies reativas de oxigênio (EROs) e a ação das substâncias antioxidantes a fim de evitar o estresse oxidativo e suas consequências. Avaliou-se o efeito da suplementação com vitaminas ADE no metabolismo oxidativo destes animais. Para tanto, 18 equinos mestiços foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: tratado e controle (GT) e controle (GC).Os animais do GT receberam complexo vitamínico ADE (1 mL/50 kg de peso vivo) pela via intramuscular profunda aos 30 e 15 dias antes do jogo. Os cavalos do GC receberam, pela mesma via de administração e nos mesmos momentos, 10mL de solução fisiológica. Os animais jogaram um tempo de 7,5min. Foram coletadas amostras de sangue nos mesmos dias de tratamento e imediatamente antes e aos 15, 90 e 180 minutos após o jogo. Foram determinadas as concentrações sanguíneas de CK, LDH, lactato, glicose, AST, GSH, SOD e MDA. Após o jogo o GT apresentou maiores valores para AST, lactato e glicemia que o GC, sugerindo melhor aproveitamento energético dos animais tratados. Os valores maiores de GSH e menores de lactato no GT antes da prova sugerem maior aporte antioxidante nos animais tratados. A manutenção dos teores de MDA indica que nenhum dos grupos entrou em estresse oxidativo.

Estresse oxidativo e aumento da apoptose em neutrófilos de cães com azotemia pré-renal / Oxidative stress and increase in apoptosis index of neutrophils from dogs with prerenal azotemia

O presente trabalho tem como objetivo testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre na uremia, cães com azotemia pré-renal sofrem estresse oxidativo, o qual está relacionado com alterações do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. Para tal, foi determinada a peroxidação lipídica pela quantificação do malondialdeído (MDA) e o status antioxidante total do plasma de 15 cães normais e 10 com azotemia pré-renal, correlacionando-os com a produção de superóxido e o índice apoptótico dos neutrófilos. As determinações do MDA e do status antioxidante total foram estabelecidas empregando-se um conjunto de reagentes comerciais. Por meio de citometria de fluxo capilar, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos isolados de sangue periférico foram determinadas utilizando-se a sonda hidroetidina e o sistema anexina V-PE, respectivamente. Cães azotêmicos (26,29±5,32g/L) apresentaram menor concentração (p=0,0264) do antioxidante albumina em relação ao grupo-controle (30,36±3,29g/L) e também uma menor (p=0,0027) capacidade antioxidante total (2,36±0,32 versus 2,73±0,24mmol/L), enquanto não houve alteração da peroxidação lipídica plasmática e da produção de superóxido neutrofílica. Concluiu-se que, à semelhança do que ocorre na uremia, condições azotêmicas pré-renais no cão causam estresse oxidativo e aceleração da apoptose dos neutrófilos.

This study aims to test the hypothesis that, similarly to what occurs in uremia, dogs with prerenal azotemia suffer oxidative stress associated with changes in oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils. For this purpose, fifteen normal dogs and ten with prerenal azotemia had lipid peroxidation determined by quantifying the malondialdehyde (MDA) and had plasma total antioxidant status evaluated, correlating them with the superoxide production and apoptotic index of neutrophils. MDA and plasma total antioxidant status were determined using commercial reagents. Using capillary flow cytometry, superoxide production and apoptosis were determined from isolated neutrophils of peripheral blood using the hydrithidine and Annexin V-PE probe system, respectively. Azotemic dogs (26.29±5.32g/L) had a lower concentration (p=0.0264) of the plasma antioxidant albumin than the control group (30.36±3.29g/L) and also had lower (p=0.0027) total antioxidant status (2.36±0.32 versus 2.73±0.24mmol/L), while no alterations were observed in plasma lipid peroxidation and superoxide production. It was concluded that, similarly to what occurs in uremia, prerenal azotemia causes oxidative stress and acceleration of neutrophil apoptosis in dogs.

Perfil proteico e metabolismo oxidativo de cordeiros experimentalmente infectados pelo Haemonchus contortus e suplementados com selênio e vitamina E / Protein Profile and oxidative metabolism of lambs experimentally infected with Haemonchus contortus and supplemented with selenium and vitamin E

Para avaliar a influência da suplementação com selênio e vitamina E sobre o perfil proteico e metabolismo oxidativo de cordeiros infectados experimentalmente pelo Haemonchus contortus, trinta cordeiros fêmeas foram distribuídos em quatro grupos: G1 (n=10): animais infectados; G2 (n=10): infectados e suplementados; G3 (n=5): controle; e G4 (n=5): não infectados e suplementados. Os grupos 1 e 2 receberam 500 larvas de H. contortus (L3), via oral, por um período de 20 dias, com intervalo de dois dias entre as doses. A suplementação nos grupos 2 e 4 foi realizada no dia zero, com 0,1mg kg-1 de Selenito de sódio (1,67 por cento) e com 2.000UI de vitamina E por via intramuscular (IM). Somente a vitamina E foi reaplicada no dia 30. As coletas de sangue para determinação do perfil proteico (proteína total, albumina, alfa, beta e gamaglobulina) e metabolismo oxidativo (espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico-TBARS e a enzima glutationa peroxidase (GSPX) foram realizadas nos dias zero, 20, 30, 45, 60 e 80. OPG foi quantificado nos dias 0, 20 ,45 e 80. Em relação aos valores de proteínas totais, albumina, betaglobulina e gamaglobulina, as principais diferenças foram observadas quando os grupos parasitados foram comparados com o grupo somente suplementado; e este manteve valores mais elevados. Conclui-se que não há influência da suplementação com selênio e vitamina E no perfil proteico e metabolismo oxidativo quando os cordeiros se encontram severamente parasitados por H.contortus.

The objective of the present study was to describe the influence of supplementation with selenium and vitamin E on the protein and oxidative profiles of lambs experimentally infected with Haemonchus contortus. Thirty female lambs were divided into four groups as follows: G1 (n=10): infected animals; G2 (n=10): infected and supplemented; G3 (n=5): control; G4 (n=5): non-infected and supplemented. Groups 1 and 2 received 500 H. contortus larvae (L3) orally for a period of 20 days, with 2-day intervals between doses. Supplementation in groups 2 and 4 was performed on day zero by injecting 0.1mg kg-1 of sodium selenite solution (1.67 percent) and 2,000IU vitamin E through the intramuscular (IM) route. Vitamin E alone was injected once again on day thirty. The blood samples to determine the protein profile (total protein, albumin, alpha, beta and gamma) and oxidative metabolism (species reactive to thiobarbituric acid and glutathione peroxidase (GSPX) were performed on days zero, 20, 30, 45, 60 and 80. The OPG was quantified on days 0, 20, 45 and 80. Regarding the values of total proteins, albumin, beta and gamma globulins, the main differences were observed when the parasitized groups were compared to the supplemented, non-infected group, the latter exhibiting higher values. It is concluded that there is no influence of supplementation with vitamin E and selenium in the protein profile and oxidative metabolism when the lambs are severely parasitized with H. contortus.

Efeito do tempo de conservação de polimorfonucleares do sangue de bezerros sobre o metabolismo oxidativo e a atividade de fagocitose de Escherichia coli / Effect of conservation time on bovine polymorphonuclear leukocytes in calves blood on oxidative burst and Escherichia coli phagocytosis activity

Foram avaliados os efeitos do tempo sobre o metabolismo oxidativo e a fagocitose de Escherichia coli, em amostras de polimorfonucleares (PMN) do sangue, de cinco bezerros hígidos, conservadas em banho de gelo por duas (t2), quatro (t4), seis (t6), 12 (t12) e 24 (t24) horas. O metabolismo oxidativo foi avaliado utilizando o Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH-DA) e a E. coli, como estímulo. Para a fagocitose a mesma bactéria foi utilizada. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. O metabolismo oxidativo basal dos PMN do sangue de bezerros foi maior nos tempos t4, t6 e t12, do que em t2 (p<0,05). A intensidade de fluorescência do metabolismo oxidativo induzido pela bactéria foi maior nos tempos t4 e t6 do que em t2 (p<0,05). A comparação entre o metabolismo basal e induzido pela bactéria, em cada um dos tempos, mostrou que a maior diferença ocorreu em t2, com valores da média geométrica e desvios padrão respectivos de 18,3 ± 4,4 e 26,7 ± 1,8 (p< 0,05). A atividade de fagocitose, medida pela intensidade de fluorescência, foi maior para as amostras mantidas em gelo por 6 horas do que para t2, t4 e t12 (p<0,05). O percentual de fagocitose não diferiu entre os tempos. O tempo ideal para análise do metabolismo oxidativo foi o deduas horas. Maiores estudos são necessários para se verificar a influência do tempo de conservação na fagocitose de E. coli por PMN do sangue de bovinos.

The time effect on oxidative burst and phagocytosis of Escherichia coli by polymorphonuclear leukocytes of 5 healthy calve blood samples were evaluated. Samples were kept on ice bath for two (t2), four (t4), six (t6), twelve (t12) and 24 hours (t24) before the tests. The oxidative burst was measured using the 2',7'-dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA) and E.coli as stimulus, also the same bacteria was used to phagocytosis process. The PMN basal oxidative burst of calves blood samples were analyzed by flow cytometry and were higher at times t4, t6 and t12 (p<0,05) than at t2. The oxidative burst fluorescence intensity induced by bacteria was higher at the times t4 and t6 than at t2 (p<0,05). The comparison between the basal oxidativeburst and the one induced by bacteria on each time, showed t2 time as the one with the highest difference, with geometric media and standard deviation of 18,3 ± 4,4 and 26,7 ± 1,8 (p< 0,05), respectively. Phagocytosis activity was measured by fluorescence intensity and was higher on samples kept on ice bath for 6 hours than those at t2, t4 and t12 (p<0,05). The phagocytosis percentage did not differ between the different times. The ideal time to test the oxidative burst was 2 hours (t2). Further researches are necessary to verify the conservation time influence on E.coli phagocytosis by PMN of bovine blood.